pET-N-His-PreScission-SUMO plasmid vector原核表达质粒双标签载体 BioVector NTCC质粒载体菌种细胞基因保藏中心

pET-N-His-PreScission-SUMO plasmid vector原核表达质粒双标签载体

pET-N-His-PreScission-SUMO是一种用于表达N端同时含有His标签(His tag)和SUMO标签(SUMO tag)双标签的目的蛋白的原核表达质粒。His标签有利于通过亲和层析方法进行目的蛋白的纯化，而SUMO标签则有利于改善目的蛋白的折叠，增加目的蛋白可溶性和产量。表达后的含有目的蛋白的融合蛋白可以通过PreScission Protease (P2302/P2303)酶切去除His标签但保留SUMO标签，也可以通过SUMO Protease (P2312)酶切去除N端的His和SUMO两个标签。

如果通过无缝克隆技术(Seamless Cloning Kit, 无缝克隆试剂盒)在SUMO标签酶切位点后插入目的蛋白ATG起始的序列，SUMO Protease酶切后，可以确保表达的目的蛋白氨基端(N端)刚好从甲硫氨酸(Methione)开始，不会增加或减少任何一个氨基酸，实现目的蛋白的完美正确表达。

本质粒为卡那霉素抗性。

本质粒含有T7启动子/lac操纵子，可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点根据读码框插入目的基因就可以表达N端含有His和SUMO双标签的目的蛋白。

本载体在N端His标签后含有PreScission Protease识别的八肽序列LEVLFQGP，因此在目的蛋白纯化后可以利用PreScission Protease酶切除去N端的His标签，但在SUMO融合蛋白的N端还会保留两个额外的氨基酸GP。在用SUMO Protease酶切除去SUMO标签的时候，SUMO Protease识别的是SUMO蛋白的空间结构，通过无缝克隆的方式在CAGATTGGTGGA (对应氨基酸为QIGG)序列后插入目的蛋白的基因序列，在用SUMO Protease进行酶切的时候，其正好在QIGG后产生酶切，因此可以产生不带任何额外氨基酸的目的蛋白，而这是很多做蛋白结构和功能研究的研究人员所梦寐以求的。

pET-N-His-PreScission-SUMO质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide Position
f1 origin 12-467
Kanamycin resistance ORF 563-1645
PBR 322 origin 2084
LacI coding sequence 3518-4597
T7 promoter 4988-5004
His tag coding sequence 5088-5105
PreScission recognition site sequence 5115-5138
SUMO tag coding sequence 5151-5441
Multiple cloning site(BamHI-XhoI) 5442-5486
T7 Terminator 5554-5600
pET-N-His-PreScission-SUMO质粒(5625bp)的图谱：

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