BioVector® Hep3B 仑伐替尼耐药细胞系 / BioVector® Hep3B Lenvatinib-Resistant Cell Line (Hep3B-LR)

通用定义 / General Definition:

BioVector® Hep3B-LR 是通过在含低浓度仑伐替尼 (Lenvatinib) 的培养基中长期梯度诱导培养，从亲本 Hep3B（人肝细胞癌细胞系）中筛选出的耐药亚系。仑伐替尼是一种多靶点受体酪氨酸激酶 (RTK) 抑制剂，主要靶向 VEGFR 1-3、FGFR 1-4、PDGFRα、KIT 和 RET。Hep3B-LR 细胞系不仅对仑伐替尼的半抑制浓度 (IC50) 显著高于亲本细胞，且通常表现出增强的侵袭能力、上皮-间充质转化 (EMT) 特征以及激活的旁路信号通路（如 EGFR、MET 或 PI3K/Akt 信号的上调）。

BioVector® Hep3B-LR is a resistant subline derived from the parental Hep3B human hepatocellular carcinoma (HCC) cell line through long-term, gradient exposure to Lenvatinib. Lenvatinib is a multi-target receptor tyrosine kinase (RTK) inhibitor that primarily targets VEGFR 1-3, FGFR 1-4, PDGFR alpha, KIT, and RET. Hep3B-LR cells exhibit a significantly higher IC50 for Lenvatinib compared to the parental cells and often demonstrate enhanced invasive potential, Epithelial-Mesenchymal Transition (EMT) characteristics, and activated bypass signaling pathways (such as upregulation of EGFR, MET, or PI3K/Akt).

BioVector® Hep3B-LR 技术参数 (Technical Specifications)

1. 细胞来源与特征

• 亲本细胞： Hep3B (HBV 阳性，含整合的乙肝病毒基因组)。

• 耐药诱导： 采用维持剂量（如 1 uM - 10 uM，视具体批次耐药倍数而定）持续刺激。

• 形态学： 相比亲本细胞，耐药株可能表现出更明显的梭形外观，细胞间隙增大，具有间充质细胞特征。

• 验证指标：

  • 耐药指数 (RI)： 通常 RI 大于 5-10 倍。

  • 标志物变化： E-cadherin 表达下降，Vimentin 或 N-cadherin 表达上升。

2. 培养条件

• 基础培养基： BioVector® MEM 或 DMEM。

• 血清添加： 10% BioVector® 优质胎牛血清 (FBS)。

• 耐药维持： 为保持耐药表型，培养基中需定期添加特定浓度的仑伐替尼。

• 培养环境： 37 摄氏度，5% 二氧化碳。

• 传代策略： 1:3 至 1:4 比例传代。耐药株的倍增时间通常比亲本细胞稍长。

主要科研应用 (Research Applications)

1. 耐药机制研究

• 旁路激活： 研究 FGFR 信号被抑制后，细胞如何通过激活 HGF/MET 或 HER3 信号通路实现免疫逃逸。

• 表观遗传调控： 探索微 RNA (miRNA) 或长链非编码 RNA (lncRNA) 在调控仑伐替尼敏感性中的作用。

2. 联合用药筛选

• 增敏实验： 寻找能够逆转耐药的联合用药方案，例如仑伐替尼联合 PD-1 抑制剂、MEK 抑制剂或自噬抑制剂。

• 二线药物评价： 评估新型激酶抑制剂对仑伐替尼耐药细胞的杀伤活性。

3. 动物模型构建

• 耐药异种移植 (CDX)： 将 Hep3B-LR 植入裸鼠皮下或原位，建立用于体内药效评估的耐药肿瘤模型。

实验操作注意事项 (Experimental Guidelines)

• 药物清除期： 在进行正式的药敏实验前，通常需要将细胞置于无药培养基中培养 2-3 天（Drug-free period），以消除培养基中残留药物对实验结果的干扰。

• 定期鉴定： 建议每隔 5-10 代通过 MTT 或 CCK-8 法重新测定 IC50 值，确保耐药表型未发生丢失。

• 冻存建议： 使用含 10% DMSO、40% FBS 和 50% 基础培养基的冻存液，并在冻存管中记录当前的药物维持浓度。

技术指标 (Technical Data Summary)

注意 / Note: 由于 Hep3B 细胞系含有 HBV 序列，必须在生物安全二级 (BSL-2) 环境下操作。仑伐替尼耐药株的构建是一个动态过程，不同实验室诱导出的株系可能在激活的旁路途径上存在差异。

Since the Hep3B line contains HBV sequences, it must be handled under BSL-2 conditions. The generation of Lenvatinib-resistant sublines is a dynamic process; sublines from different labs may vary in the specific bypass pathways they activate.

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