BioVector® pINA1312 解脂耶罗维亚酵母表达载体 / BioVector® pINA1312 Yarrowia lipolytica Expression Vector

通用定义 / General Definition:BioVector® pINA1312 是一种专为解脂耶罗维亚酵母 (Yarrowia lipolytica) 开发的高效表达载体。作为一种非常规酵母，Y. lipolytica 以其强大的蛋白质分泌能力和脂质代谢特性而闻名。pINA1312 载体通常含有强力的单倍体启动子 (pXPR2) 或其衍生物，以及用于高效分泌的信号肽（如 XPR2 pre-pro 序列）。它常被用于工业酶制剂、疏水性蛋白质以及代谢工程中关键酶的异源表达。

BioVector® pINA1312 is a specialized expression vector designed for Yarrowia lipolytica, a non-conventional yeast renowned for its exceptional protein secretion capacity and lipid metabolism. The pINA1312 vector typically features a strong promoter (such as the pXPR2 promoter or its derivatives) and an efficient signal peptide (like the XPR2 pre-pro sequence) for extracellular secretion. It is a workhorse for the heterologous expression of industrial enzymes, hydrophobic proteins, and key enzymes in metabolic engineering pathways.

BioVector® pINA1312 技术参数 (Technical Specifications)

1. 载体核心元件

• 启动子：pXPR2（或改良的准组成型/诱导型启动子）。XPR2 启动子通常受 pH 和培养基成分（如蛋白胨）诱导。

• 信号肽：XPR2 pre-pro 序列，确保目的蛋白进入分泌途径。

• 选择标记：

  • 酵母端： 通常为 URA3（尿嘧啶缺陷型筛选）或 LEU2。

  • 细菌端：Ampicillin (氨苄青霉素 / AmpR)。

• 复制子：

  • 大肠杆菌端：pMB1 (pBR322) origin。

  • 酵母端：通常为整合型（Integration），通过同源重组整合至染色体，以确保遗传稳定性。

2. 分泌机制

pINA1312 引导的蛋白质翻译后进入内质网，通过 XPR2 的 pre-pro 序列进行多步加工。Pre 序列在进入 ER 时被切除，而 Pro 序列在 Golgi 体中被 KEX2 类蛋白酶切除，最终释放成熟的蛋白质到培养基中。

主要科研应用 (Research Applications)

1. 工业酶制剂生产

• 脂肪酶与蛋白酶： 利用 Y. lipolytica 的天然优势，大规模分泌具有高度活性的工业酶类。

2. 疏水性蛋白表达

• 膜蛋白与脂质相关酶： 解脂耶罗维亚酵母拥有极其发达的内质网系统，非常适合表达和折叠复杂的膜蛋白或需要脂质环境的酶。

3. 代谢工程

• 脂肪酸合成途径： 引入外源基因以改造酵母的脂质合成路径，生产高价值脂肪酸或类胡萝卜素。

实验操作注意事项 (Experimental Guidelines)

• 宿主菌选择： 必须使用相应的缺陷型宿主菌（如 Po1g, Po1h 或 Polf）。如果载体是 URA3 标记，宿主必须是 ura3-。

• 培养基 pH 调节：

  重要提示： XPR2 启动子的活性高度依赖于 pH 值。通常在 pH > 6.0 的环境中活性较高，而在酸性环境下会被抑制。

• 整合验证： 转化后，建议通过基因组 PCR 验证目的片段是否成功整合至酵母染色体。

• 多拷贝整合： 在某些情况下，可以通过增加筛选压力获得多拷贝整合子，从而显著提升蛋白产量。

技术指标 (Technical Data Summary)

注意 / Note: pINA 系列载体有多个版本（如 pINA1269, pINA1292 等），主要区别在于启动子的强弱和筛选标记的不同。pINA1312 在需要受控诱导表达的实验中表现尤为稳定。The pINA series includes several variants (e.g., pINA1269, pINA1292). The pINA1312 variant is particularly stable for experiments requiring controlled, inducible expression.

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