BioVector® pcDNA3.1-HA-SOST 过表达质粒 / BioVector® pcDNA3.1-HA-SOST Overexpression Plasmid

通用定义 / General Definition:BioVector® pcDNA3.1-HA-SOST 是一种用于在哺乳动物细胞中高效表达 SOST (Sclerostin) 蛋白的重组真核表达质粒。该载体以经典的 pcDNA3.1(+) 为骨架，利用强大的 CMV 启动子 驱动基因转录。在 SOST 基因的 N 端或 C 端融合了一个 HA (Hemagglutinin) 标签，便于利用抗 HA 抗体通过免疫印迹 (WB)、免疫沉淀 (IP) 或免疫荧光 (IF) 检测 SOST 蛋白的表达与定位。SOST 是一种由骨细胞分泌的糖蛋白，是 Wnt 信号通路 的重要抑制因子，在骨代谢和骨质疏松研究中具有核心地位。

BioVector® pcDNA3.1-HA-SOST is a recombinant eukaryotic expression plasmid designed for the high-level production of SOST (Sclerostin) protein in mammalian cells. Built on the classic pcDNA3.1(+) backbone, it utilizes the powerful CMV promoter for robust transcription. An HA (Hemagglutinin) tag is fused to either the N- or C-terminus of the SOST gene, enabling easy detection and purification via Western Blotting (WB), Immunoprecipitation (IP), or Immunofluorescence (IF) using anti-HA antibodies. SOST is an osteocyte-secreted glycoprotein that acts as a potent inhibitor of the Wnt signaling pathway, making it a pivotal target in bone metabolism and osteoporosis research.

BioVector® pcDNA3.1-HA-SOST 技术参数 (Technical Specifications)

1. 载体核心元件

• 启动子：CMV (Cytomegalovirus) 启动子，在多种哺乳动物细胞（如 HEK293, MC3T3-E1, COS-7）中具有极高的转录活性。

• 目的基因：SOST (Sclerostin)，通常源自人 (Human) 或小鼠 (Mouse) 序列。

• 融合标签：HA-tag (YPYDVPDYA)，用于蛋白质示踪和亲和纯化。

• 选择标记：

  • 真核：Neomycin/G418，用于筛选稳定转染细胞株。

  • 原核：Ampicillin (氨苄青霉素)，用于大肠杆菌中的质粒扩增。

• 复制子： pUC origin (高拷贝)。

2. 蛋白功能背后的生物学

SOST 通过结合 LRP5/6 受体，阻止 Wnt 配体与其结合，从而抑制成骨细胞的分化和骨形成。通过该质粒过表达 SOST，可以模拟骨硬化症或研究骨量下降的分子机制。

主要科研应用 (Research Applications)

1. Wnt 信号通路抑制研究

• 报告基因检测： 将 pcDNA3.1-HA-SOST 与 TOPFlash 荧光素酶报告质粒共转染，观察 SOST 对 Wnt 通路活性的定量抑制效果。

2. 骨代谢分子机制

• 成骨分化抑制： 在 MC3T3-E1 或原代骨髓间充质干细胞 (BMSCs) 中过表达 SOST，研究其对 Runx2、ALP 和骨钙素表达的影响。

3. 蛋白相互作用 (Co-IP)

• 受体结合实验： 利用 HA 标签进行免疫沉淀，验证 SOST 与 LRP5/6 或 LRP4 的相互作用强度及位点。

4. 分泌蛋白研究

• 上清检测： SOST 是分泌型蛋白。转染后收集细胞培养上清，通过 HA 抗体检测分泌到胞外的 SOST 含量。

实验操作注意事项 (Experimental Guidelines)

• 转染效率： 建议使用 HEK293T 细胞进行初期蛋白表达验证，因其具有极高的转染效率。

• 空载对照： 实验必须设置 pcDNA3.1-HA (Empty Vector) 作为对照组，以排除载体本身和转染试剂对细胞状态的影响。

• 标签位置： 注意 HA 标签是在 N 端还是 C 端。如果 SOST 含有信号肽，N 端标签应置于信号肽之后，以免在分泌加工过程中被切除。

• 分泌特性： SOST 蛋白会分泌到胞外。若 WB 检测胞内信号较弱，请尝试浓缩细胞培养液上清进行检测。

技术指标 (Technical Data Summary)

注意 / Note: SOST 过表达在某些细胞系中可能会诱导细胞凋亡或生长减缓。在建立稳转株时，建议进行预实验确定最佳的 G418 筛选浓度。Overexpression of SOST may induce apoptosis or growth retardation in certain cell lines. When establishing stable clones, pre-determination of the optimal G418 concentration (kill curve) is strongly recommended.

BioVector NTCC质粒载体菌株细胞蛋白抗体基因保藏中心

电话:400-800-2947

工作QQ/微信同号:1843439339

网址

http://www.biovector.net