BioVector® HEK293T/GPR68 稳定表达细胞株技术档案 / BioVector® HEK293T/GPR68 GPCR Cell Line Datasheet

一、 背景与来源说明 / Background & Origin

HEK293T/GPR68 是利用慢病毒转导或质粒转染技术，在人胚肾细胞（HEK293T）中稳定过表达人源 GPR68（G Protein-Coupled Receptor 68，又称 OGR1, Ovarian Cancer G Protein-Coupled Receptor 1）的重组 GPCR 功能细胞株。GPR68 属于质子感知型 G 蛋白偶联受体（Proton-sensing GPCR），在微酸性肿瘤微环境（pH 6.4–6.8）下被激活，主要通过 $G_{q/11}$ 蛋白通路引发细胞内钙离子（$\text{Ca}^{2+}$）释放与肌醇三磷酸（$\text{IP}_3$）积累，或偶联 $G_s$ 驱动 cAMP 增加。该细胞株广泛用于质子感知受体变构调节剂、小分子激动剂/拮抗剂的高通量功能筛选（HTS）及 FLIPR 钙流检测。

二、 细胞生物学特征 / Biological Characteristics

• 宿主细胞 / Host Line：人胚肾细胞（HEK293T, SV40 Large T antigen positive）

• 靶点基因 / Target Gene：Human GPR68 / OGR1 (GenBank Accession: NM_003485)

• 生长特性 / Growth Properties：贴壁生长（Adherent），呈铺路石状或多角形上皮样形态

• 信号通路与功能反应 / Signaling Pathway：

  • 内源性配体/激活条件：细胞外质子（酸性 pH 6.4–6.8，pH 下降直接激活受体）

  • 偶联下游通路：$G_{q/11} \rightarrow \text{PLC}\beta \rightarrow \text{IP}_3/\text{DAG} \rightarrow \text{Ca}^{2+}$ 动员；部分偶联 $G_s \rightarrow \text{cAMP}$

• 筛选标记 / Selection Marker：Puromycin（嘌呤霉素, 1–2 µg/mL）或 G418，维持受体稳定高表达

三、 培养条件与传代指南 / Culture & Handling Protocols

1. 完全培养基配方 / Complete Medium Formulation

• 基础培养基 / Basal Medium：High-Glucose DMEM（4.5 g/L D-Glucose, 含 L-Glutamine 及 Sodium Pyruvate）

• 血清添加 / Serum：10% 优质胎牛血清（FBS）

• 选择性抗生素 / Selection Antibiotic：1–2 µg/mL Puromycin（用于维持表达，复苏首代建议暂不加抗生素）

• 双抗 / Antibiotics：100 U/mL 青霉素 + 100 µg/mL 链霉素

2. 培养条件与传代规范 / Incubation & Subculture

• 培养环境 / Conditions：37°C，5% $\text{CO}_2$，饱和湿度。注意维持培养基 pH 在 7.2–7.4，避免培养基变酸导致受体发生脱敏。

• 维持密度 / Density：汇合度达到 80% – 90% 时传代，切勿让细胞过密重叠，否则容易剥落。

• 传代操作 / Subculture：

  1. 吸除旧培养基，以 PBS 温和清洗 1 次。

  2. 加入 0.25% Trypsin-EDTA，室温或 37°C 消化 1–2 分钟（HEK293T 极其易消化，避免过度消化）。

  3. 加入完全培养基终止消化，轻柔吹打制成单细胞悬液。

  4. 按 1:4 至 1:8 比例传代接种，每 2–3 天传代一次。

四、 技术指标简表 / Technical Data Summary

BioVector® HEK293T/GPR68 Stable Cell Line Datasheet (English)

1. Background & Context

The HEK293T/GPR68 stable cell line is an engineered recombinant model overexpressing human GPR68 (OGR1), a proton-sensing G protein-coupled receptor. GPR68 responds to extracellular acidification (pH 6.4–6.8) typical of ischemic or tumor microenvironments, transducing signals primarily via the $G_{q/11}$-phospholipase C-$\text{Ca}^{2+}$ pathway. This cell line provides a robust platform for high-throughput screening (HTS) of small-molecule modulators, FLIPR calcium mobilization assays, and GPCR signal transduction studies.

2. Biological Characteristics

• Host & System: Human Embryonic Kidney 293T (Homo sapiens).

• Target Expression: Human GPR68 (NCBI Reference: NM_003485).

• Growth Properties: Adherent monolayer.

• Signal Output: Acidification-induced intra-cellular $\text{Ca}^{2+}$ flux, $\text{IP}_3$ accumulation, and secondary cAMP stimulation.

3. Culture Protocols

• Basal Medium: DMEM High Glucose + 10% FBS + 1% Pen-Strep.

• Maintenance Antibiotic: Puromycin (1–2 µg/mL).

• Subculture Method: Dissociate using 0.25% Trypsin-EDTA for 1–2 min at room temperature. Split ratios range from $1:4$ to $1:8$ every 2–3 days.

4. Technical Data Summary

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